شناسایی مولکولی گونه های تیلریا و ناقلین آن در گاوهای شهرستان یزد با روش Semi-nested PCR

زمینه مطالعه: تیلریوز یکی از بیماریهای تک یاخته‌ای خونی در گاو بوده که سبب مرگ و میر بالا می‌شود. تاکنون مطالعات میکروسکوپی زیادی درباره شناسایی گونه‌های آلوده کننده تیلریا در گاو و کنه‌های ناقل صورت گرفته که در مقایسه با روش‌های مولکولی از حساسیت و ویژگی کمی‌برخوردارند. هدف: دراین مطالعه سعی شدگونه‌های تیلریاوناقلین آن درگاوهای شهرستان یزدباروشSemi-nested PCR موردشناسایی قرارگیرند. مواد و روش کار: طی ماههای خرداد تا شهریور سال 1391، تعداد 100 نمونه خون EDTA به همراه گسترش‌های نازک خون  ازگاوهای شیری  نژاد  هلشتاین مشکوک به تیلزیوز بدون سابقه واکسیناسیون بر علیه بیماری تهیه گردید. همزمان  با بازرسی بدن گاوها  تعداد 249 عدد کنه جمع آوری شدندگسترش تهیه شده با گیمسا رنگ آمیزی شدندو  DNA از  نمونه‌های خون با استفاده از کیت تجاری استخراج گردیدند. کنه‌ها همچنین با استفاده از کلید‌های تشخیص شناسایی و بر اساس جنس و گونه کنه به 50 مجموعه 5 کنه‌ای تقسیم  شدند و بااستفاده از  لوپ  و وسایل حشره شناسی غدد بزاقی آنها جدا سازی و DNA آنها نیز استخراج گردید. نمونه‌های DNA  استخراج شده با آنSemi-nested PCR بر روی ژن18S rRNA، مورد آزمایش قرار گرفتند. جهت تشخیص تیلریا لستوکاردی و تفریق آن از تیلریا آنولاتا در نمونه‌های کنه از روش PCR-RFLP استفاه شد. نتایج: در بررسی اولیه انجام شده با میکروسکوپ نوری، در 4 گسترش خونی (4%) اشکال حلقوی انگل مشاهده گردید. همچنین همه کنه‌های جمع آوری شده  هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم تشخیص داده شدند. نتایج به دست آمده با روش Semi-nested PCR، نشان دهنده آلودگی 11 نمونه خون (11%) و سه مجموعه غدد بزاقی کنه به تک یاخته تیلریا آنولاتا بودند. هیچ یک  از نمونه‌ها آلوده به تیلریا اورینتالیس نبودند. مطالعات تکمیلی با PCR-RFLP با استفاده از آنزیم MspI نیز نشان داد که نمونه‌های کنه‌ها همگی از نظر آلودگی به تیلریا لستوکاردی منفی می‌باشند. نتیجه گیری نهایی: بر پایه نتایج بدست آمده  تیلریا آنولاتا و کنه هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم عامل و ناقل مهم  تیلریوز گرمسیری در شهرستان یزد می‌باشند.